伍文定，字时泰，湖北松滋人。臂力过人，擅长骑马、射箭，议论事情慷慨激昂。当初做常州推官，办事精明、勤快，很会断案，被称为强干的小吏。魏国公徐俌与百姓争抢田地，文定把田判给了百姓，刘瑾得到徐俌送的重礼后，就制造大案，巡抚艾朴以下十四个人都被逮捕了，文定已经升调为成都同知，也被抓进京城的大牢中，结果被罢官为民。刘瑾败亡以后，他重新起用到嘉兴做官。
江西姚源的盗贼王浩八等，流窜到浙江开化抢劫，都御史俞谏传令让文定与参将李隆、都指挥江洪、佥事储珊一起讨伐他，驻军华埠。而都指挥白弘与湖州知府黄衷另外在马金扎营，盗贼刘昌三攻破营寨，活捉了白弘，官军受到了很大打击。浩八攻打华埠，江洪、文定打败了他，追到孔埠，李隆、储珊也追到池淮，破坏了敌人的巢穴，接着又进攻淫田。江洪率奇兵深入敌区，中了盗贼的奸计，与指挥张琳等都被俘。文定等将因为殿后得以生还，盗贼也就此逃回江西去了，俞谏等把文定忠于职责、勇敢作战的事迹上报朝廷后，朝廷诏令主管部门对他加以奖励。后来他升任河南知府，设计擒获了大盗张勇、李文简，因为才干优裕，能干大事，所以调往吉安。期间又定计平定了永丰和大茅山的盗贼，后来，又帮助巡抚王守仁平定了桶冈、横水。
宸濠叛乱发生后，吉安的百姓、士绅们争先恐后地逃跑或躲藏，文定把逃亡的斩了一个，群众才安静下来。然后他把守仁迎入城中，知府刑王旬、徐琏、戴德孺等先后到来，一起讨伐宸濠，由文定当大将。文定亲身冒着箭头和滚石的威胁向前，大火烧着胡须也不退后一步，宸濠之乱被平定，他战功最大，被提升为江西按察使，张忠、许泰到南昌，想顶他的战功，而守仁已经拿获宸濠带到浙江去了，张忠等失望后非常恼恨，文定出来拜见，就把他给绑了，文定骂道“：我不顾诛杀九族为国家平定反贼，有什么罪？你们是天子的心腹，侮辱国家的忠臣义士，为反贼报仇，依法该斩了你们。”张忠更加恼火了，就把文定棰倒在地上，文定后来上书皇帝请求解职，武宗没有回答他。
不久，他升任广东右布政使，尚未赴任，世宗皇帝即位，他上书检举张忠等人的罪状，并且说：“过去张忠、许泰与刘晖到江西来，张忠自称是天子的弟弟，刘晖